Dpph Là Gì

  -  
Nguyên tắc của phương phápCách pha hóa chấtTiến hành bội phản ứngCông thức tính kết quảCác lưu ý cơ bảnTài liệu tham khảo

NGUYÊN TẮC

Phương pháp xác định khả năng bắtgốc thoải mái DPPHᐧ (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) được phát triển bởi Blois . đối chiếu này dựa vào sự chuyển đổi màu của hỗn hợp DPPH. DDPH﮲ là cội tự do màu sắc bền lâu tím, có điện tử không ghép đôi trên nguyên tử nito tạo ra thành hệ thống liên hợp năng lượng điện tử. Electron thoải mái của phân tử nito trong DDPH﮲ khi bắt cặp với gốc hydro từ hóa học kháng oxyhóa làm mất đi đi màu sắc tím đặc thù của gốc tự do DDPH﮲ trongdung dịch methanol. Năng lực khử cội DDPH﮲ của một chất kháng oxy hóa thể hiện ở tầm mức độ làm bớt màu của dung dịch DDPH, được xác định bằng cách đo độ hấp phụ quang ở cách sóng λmax = 517 nm. Phụ thuộc đường chuẩn xác định giá trị IC50 .

Bạn đang xem: Dpph là gì

Bạn vẫn xem: Dpph là gì

PHA HÓA CHẤT

1.Pha dung dịch DPPH

Cân 0.0056g DPPH hòa trong 5mL Methanol tinh khiết → hỗn hợp DPPH 30mM (stock 10X), bảo quản nhiệt độ lạnh, bọc kín đáo bằng giấy bạc.

Khi làmthí nghiệm, pha loãng stock 10X → 1X (3mM)

2.Pha mẫu cần phân tích

Đối với mẫu mã dạng rắn (cao chiết/ bột):

-Xác định dung môi để hòa rã mẫu. Lấymột không nhiều mẫu, hòa trong các dung môi khác nhau (nước, methanol, ethanol, acetone,DMSO,… ). Quan gần cạnh lựa lựa chọn dung môi nào có chức năng hòa tan hoàn toàn mẫu cầnphân tích. Nếu đang biết mẫu của mình hòa rã trong chất nào rồi, chúng ta có thểbỏ qua cách này.

-Hòa tan 1000 ug mẫu mã vào 1 mL dung môi, nhận được dung dịch tất cả nồng độ 1000ppm.

-Pha loãng bậc 2 liên tục (two-foldserial dilution) thành dãy các nồng độ khác biệt và ngừng ở khoảng tầm nồng độ trường đoản cú 5 –10 ppm.

Đối vớimẫu phân tích dạng lỏng (dịch chiết):

-Định lượng chất phải phân tích trongdịch tách và phụ thuộc vào chất của chúng ta là loại hợp chất gì, sẽ sở hữu những phươngpháp định lượng không giống nhau. Ví dụ, các bạn có dịch phân tách từ cải bắp tím và mong muốn phântích hoạt tính của hợp chất anthocyanin vào dịch chiết, bạn áp dụng phươngpháp “pH Vi Sai” để khẳng định dịch chiết lúc đầu có lượng chất anthocyanin là baonhiêu ppm.

-Từ dịch chiết ban đầu, pha loãng bậc2 thường xuyên (two-fold serial dilution) thành dãy những dịch tách ở độ trộn loãngkhác nhau (nên làm cho từ 7 – 10 lần pha loãng). Ở bước này, áp dụng dung môi táchchiết mẫu mã để trộn loãng mẫu.

-Từ các chất chất gồm trong dịch chiếtban đầu, xác minh hàm lượng chất yêu cầu phân tích vào dịch tách ở mỗi bậc phaloãng.

3.Pha đối chứng

Nếu sử dụng đối bệnh dương là vitamin C, pha hàng nồng độ từ bỏ 0 → 30 ppm, sử dụng dung môi là nước(Vitamin C tan giỏi trong nước)

Nếu sử dụng những đối bệnh khác, cân nặng 100 ug hóa học đối triệu chứng và hòatan trong dung môi, tiếp nối pha loãng bậc 2 về khoảng nồng độ 0 – 5 ppm.

TIẾN HÀNH PHẢN ỨNG

Trong một giếng của đĩa 96 thêm lần lượt các thành phần sau:

·100 μl mẫu phân tích/đối chứng/dung môi

·100 μl DPPH 3 milimet / methanol

→ phản bội ứng nửa tiếng trong tối, đo mật độ quang tại cách sóng 750nm

Bảng bố trí thí nghiệm

Mẫu phân tích

Mẫu trắng

Mẫu đối hội chứng dương

Mẫu đối hội chứng âm

Dung dịch DPPH

x

x

x

Mẫu phân tích

x

x

Chứng dương (Vitamin C)

x

Methanol

x

Dung môi

x

CÔNG THỨC TÍNH

Phần trăm cội tựdo DDPH﮲ được tínhtheo công thức:


*

Chú thích

SCDPPH﮲ : kĩ năng bắt gốctự vì chưng DDPH﮲ (%)As : Độ hấp thu quang của chủng loại phân tíchAb : Độ hấp thụ quang của mẫu trắngAn : Độ hấp thu của chủng loại đối chứng âm

Tính quý giá IC50 của mẫu mã thử và chủng loại đối chứng nhờ vào phương trình tuyến đường tính giữa nồng độ với % hoạt tính bắt gốc thoải mái của chúng, theo bí quyết sau:


*

Chú thích

IC50 : Nồng độ chủng loại thử, chuẩn chỉnh có thể bắt được một nửa gốc tự do thoải mái DDPH﮲a, b : lần lượt là độ dốc cùng hệ chắn của phương trình con đường tính giữ nồng độ và % bắt cội tự do.

Mẫu được thựchiện lặp lại ba lần và hiệu quả được màn biểu diễn dưới dạng cực hiếm trung bình ±SD

LƯU Ý

Có thể pha tùy ý nồngđộ DPPHᐧ, chỉ cầnđảm bảogốcDPPHᐧ trong làm phản ứng luôn dư. Tuy nhiên vậy, mình không khuyến khích chúng ta pha dung dịch DPPH ởnồngđộ thừa cao, bởi vì lúc nàymàu của dung dịch DPPH rất đậm, có thểkhó quan giáp sự thayđổi của màu sắc trước và sau bội nghịch ứng trong một vài trường hợp.

Xem thêm: Free Game - Game Boi Tinh Yeu Online

Dung dịch DPPH mẫn cảm với ánh sáng, dễ bị oxy hóa, vì vậy chúng ta không cần pha quá nhiều, trường hợp pha dư bao gồm thể bảo vệ ở nhiệt độ lạnh với bọc kín giấy bội nghĩa để tránh ánh sáng, và sử dụng sau 1-2 ngày, tránh việc dùng lúc đã lâu quá hoặc quan cạnh bên thấy color nhạt đi đối với ban đầu.

Mẫu đối triệu chứng âm là mẫu quan trọng, các bạn nên lặp lại nhiều lần chủng loại này vào một mẻ phân tách (trên 3 lần) để rất có thể có số liệu đúng chuẩn nhất.

Mẫu trắng cần thiết trong trường hợp chất phân tích của người tiêu dùng có màu, đặc biệt là những chất có màu sắc gần như là với màu sắc của hỗn hợp DPPH (anthocyanin, astaxanthin,... ). Đối với trường hợp mẫu không màu và trong suốt, các bạn cũng có thể bỏ qua mẫu trắng.

Mẫu phân tích rất cần phải hòa tan trả toàn, nếu như là dịch chiết thì dịch phân tách cần đồng bộ và không tồn tại cặn bẩn. Nếu nên thiết, các bạn có thể sử dụng filter 0.45 um để lọc mẫu trước lúc phân tích.

Dung dịch sau bội phản ứng nhằm đo OD phải đồng nhất, không có bọt khí (dễ xảy ra khi làm chủng loại vitamin C). Vào trường hợp này rất có thể dùng đầu tip hoặc tăm để khuấy nhẹ, vứt bỏ bọt khí.

Khi thêm những thành phần phản nghịch ứng vào tô 96 hoặc ống nghiệm, hỗn hợp DPPH cần được thêm sau cùng, và đảm bảo an toàn tránh tia nắng nhiều nhất bao gồm thể. Đối cùng với đĩa 96 các chúng ta cũng có thể cố gắng làm việc nhanh. Đối cùng với ống nghiệm, các bạn cũng có thể bọc lại bởi giấy bạc. Nhằm phản ứng ra mắt ở nới không có ánh sáng. Sau thời hạn phản ứng, tác dụng cần được đo ngay, không nhằm lâu bên cạnh ánh sáng.

Phần kết quả, các chúng ta cũng có thể nhập vào excel với tính toán bằng tay thủ công theo công thức tôi đã trình bày, hoặc có thể sử dụng một số phần mềm thông dụng để sở hữu được hiệu quả nhanh hơn nhé. Ở đây, bản thân đề xuất một trong những phần mềm rất gần gũi là Graphpad Prism.

Xem thêm: Hướng Dẫn Chơi Devil May Cry 4 Việt Hóa Thành Công, Cách Chơi Devil May Cry 4 Trên Pc

THAM KHẢO

2.Kedare SB, Singh R. Genesis & development of DPPH method of antioxidantassay. Journal of food science và technology. 2011;48(4):412-422.